proceso de extracción de silimarina
Silimarina, una mezcla de flavonolignanos que exhiben muchas actividades farmacológicas, se obtiene de los frutos del cardo mariano (Silybum marianum L. Gaertner). Debido al alto contenido de lípidos en los frutos de cardo, la Farmacopea Europea recomienda un proceso de extracción en dos pasos. Primero, los frutos se desgrasan durante 6 h, utilizando n-hexano; en segundo lugar, la silimarina se extrae con metanol durante 5 horas más.
Los datos presentados muestran que este proceso de extracción Soxhlet tradicional extremadamente largo se puede acortar a unos minutos mediante la extracción de líquido presurizado (PLE). PLE también permite eliminar la etapa de desengrasado requerida en el procedimiento tradicional, simplificando así el procedimiento de extracción de silimarina y evitando la pérdida de silimarina provocada por el desengrasado. Las recuperaciones de PLE obtenidas en las condiciones de extracción optimizadas son claramente mejores que las obtenidas mediante el procedimiento de extracción de Soxhlet recomendado por la Farmacopea.
Los rendimientos de PLE de silicristina, silidianina, silibina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B en acetona son 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 y 1,5 mg / g de frutos no desgrasados, respectivamente. La extracción Soxhlet de 5 h con metanol en frutos desgrasados da solo ∼72% de la cantidad de silimarina obtenida en 10 min PLE a 125 ° C.
¿Qué es Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, comúnmente llamado comoCardo de leche, el cardo mariano bendecido, el cardo mariano, el cardo mariano o el cardo de Santa María GG, es una planta anual o bianual de la familia Asteraceae. La planta, que originalmente crecía en el sur de Europa y Asia, ahora se encuentra en todo el mundo (1). Esta molesta mala hierba se cultiva actualmente como planta medicinal y es uno de los cultivos medicinales más importantes de Europa.
El cardo mariano se ha utilizado con fines medicinales durante más de 2000 años, más comúnmente para el tratamiento de enfermedades hepáticas (cirrosis y hepatitis), así como para la protección del hígado de sustancias tóxicas (2-5). El interés de la investigación reciente en esta planta ha sido estimulado por estudios que muestran su actividad antitumoral excepcionalmente alta. Los extractos de la planta se encuentran ahora bajo intenso estudio en la quimioprevención experimental del cáncer y en la mejora de los efectos secundarios de la quimioterapia (6). Informes recientes han demostrado que los extractos de esta planta también se caracterizan por muchas otras actividades farmacológicas, como efectos antiinflamatorios y antifibróticos (2, 7, 8).
La silimarina, una mezcla de flavonolignanos que exhiben muchas actividades farmacológicas, se obtiene de las semillas del cardo mariano (Silybum marianum L. Gaertner). Los procedimientos habituales utilizados hasta ahora para la extracción de silimarina se basan principalmente en métodos lentos de extracción por solvente a alta temperatura. Los inconvenientes asociados a estas técnicas han llevado a la búsqueda de nuevos procesos de extracción alternativos que además podrían mejorarextractos de silimarinacalidad. Esto último es particularmente importante en lo que respecta a la aplicación de silimarina. Los extractos de silimarina obtenidos, de hecho, podrían contener residuos orgánicos tóxicos que deben eliminarse para satisfacer la aceptabilidad del consumidor.
En un intento por mejorar el proceso de extracción de silimarina y hacerlo más efectivo y respetuoso con el medio ambiente, la extracción por solvente recientemente asistida por microondas, la extracción por solvente asistida por ultrasonido, la extracción de líquido presurizado, la extracción asistida por enzima, la extracción de fluido supercrítico y especialmente la extracción de agua subcrítica También se han desarrollado y aplicado métodos conocidos como extracción de agua caliente a presión.
Materiales y métodos
Material vegetal
Los frutos secos de S. marianum L. Gaertner se compraron en una farmacia local (Lublin, Polonia) en el otoño de 2011. Se molió y tamizó una muestra representativa suficientemente grande del material vegetal (aprox. 500 g) para obtener un tamaño de partícula de 0,4. mm. Para las extracciones se utilizaron porciones pesadas con precisión del material.
Materiales y reactivos
El extracto seco estandarizado de S. marianum L. Gaertner y silibina B (con una pureza del 98%), aplicados como patrones, se adquirió de Sigma-Aldrich, Polonia. Se adquirieron acetona, acetato de etilo, ácido fosfórico, n-hexano (todos ellos de grado reactivo analítico) y metanol (grado reactivo analítico y grado HPLC) de la Planta Química Polaca (POCh, Gliwice, Polonia). El agua se purificó usando un sistema Milli-Q de Millipore (Millipore, Bedford, MA, EE. UU.). Se aplicó vidrio neutro, obtenido como obsequio de las cristalerías locales (fracción 0,4-0,6 mm), como agente dispersante en la celda PLE.
Extracción de líquido presurizado
La PLE se realizó con un instrumento Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, EE. UU.). El material vegetal (0,5 g) se mezcló con material inerte (vidrio neutro) y se colocó en una celda de extracción de acero inoxidable de 22 ml que contenía papel de filtro en la parte inferior. Se colocó otro círculo de papel de filtro en la parte superior de la celda de extracción. Finalmente, la celda se cerró herméticamente y se colocó en el horno de calentamiento.
El contenido de la celda se extrajo a la presión de funcionamiento de 60 bar. Al final del proceso, la muestra extraída se lavó con un volumen de disolvente igual al 60% del de la celda de extracción. Finalmente, la muestra se purgó durante 60 s aplicando nitrógeno presurizado (150 psi) y el extracto se recogió en un vial de vidrio de 60 ml con una tapa de goma recubierta de teflón. El volumen del extracto recolectado estuvo entre 25 y 31 mL, dependiendo de la densidad de empaquetamiento de la celda de extracción. El extracto obtenido se transfirió a un matraz aforado de 50 mL y se llenó hasta su volumen utilizando un tipo de disolvente apropiado. Se realizaron tres extracciones independientes en las mismas condiciones. Entre las ejecuciones, el sistema se lavó con un disolvente de extracción apropiado.
Los parámetros de PLE en estudio fueron el tipo de disolvente (metanol, acetona y acetato de etilo), la temperatura (50, 75, 100, 125 y 150 ° C), el tiempo (5, 10, 15 y 20 min) y el número de ciclos de extracción (1 –5). Para el proceso de desgrasado PLE se aplicó n-hexano como solvente, y los parámetros en estudio fueron temperatura (50 y 100 ° C) y tiempo (5 y 10 min) de remoción de lípidos. Los extractos de acetona y acetato de etilo se evaporaron hasta sequedad al vacío y se redisolvieron en metanol antes del análisis cromatográfico.
Extracción de Soxhlet
Se realizaron extracciones exhaustivas en el aparato Soxhlet usando porciones de 2,0 g del material. Las muestras pesadas con precisión se transfirieron a un dedal de papel. El dedal cargado se insertó en un extractor Soxhlet de 100 ml. Las extracciones se realizaron en el proceso de dos pasos (n=3). En el primer paso del procedimiento, el material vegetal se desgrasó durante 6 h utilizando 75 mL de n-hexano. En el segundo, se extrajo silimarina durante 5 h con 75 mL de metanol. Después de enfriar a temperatura ambiente, el extracto obtenido se transfirió a un matraz aforado de 100 mL, que posteriormente se llenó hasta su volumen con metanol. Se realizaron tres extracciones independientes.
Análisis cromatográfico de extractos
Las mediciones de HPLC se realizaron en un cromatógrafo de líquidos Dionex (Dionex Corp.) que consta de un gabinete de cromatografía (LC20) que contiene una válvula de inyección automática PEEK equipada con un bucle de muestra de 10 μL, una bomba de gradiente (GP50), un detector de absorbancia (AD25) y un detector de matriz de fotodiodos (PDA100). Todo el sistema cromatográfico estaba bajo el control del sistema de adquisición de datos PeakNet6. Las separaciones cromatográficas se llevaron a cabo a 40 ° C utilizando una columna Prodigy ODS-2 (5 μm, 250 x 4,6 mm, DI) (Phenomenex, Torrance, CA, EE. UU.). La fase móvil A era una mezcla de metanol con una solución acuosa de ácido fosfórico que contenía 0,5 ml de ácido fosfórico al 75% en 100 ml de solución (35: 65, v / v). La fase móvil B era una mezcla de metanol con la solución acuosa de ácido fosfórico que contenía 0,5 ml de ácido fosfórico al 75% en 100 ml de solución (50:50, v / v). El caudal fue de 0,8 ml / min. Los análisis se realizaron en un gradiente de fase móvil con el porcentaje de B en A variando como sigue: concentración inicial, 0% B; 28 min, 100% de B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Antes del siguiente análisis, la columna se equilibró utilizando la fase móvil que contenía 0% de B durante 20 min. Cada extracto se analizó por HPLC tres veces. La longitud de onda para detectar flavonolignanos se fijó en 288 nm y también se registraron los espectros UV-Vis de 210 a 500 nm para la caracterización de los picos.
El análisis cualitativo de los extractos se realizó comparando los tiempos de retención de los picos y sus espectros UV-Vis en los extractos con respecto a los de la muestra seca de silimarina estandarizada. Para preparar la solución de silimarina seca estandarizada, se disolvió una porción de 0,02 g de la muestra que contenía 5,0 mg de silibina A + B en 50 ml de metanol. Los picos de silicristina, silidianina, silibina A, silibina B, isosilibina A y B aparecieron en tiempos de retención de 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 y 34,8 min, respectivamente. El análisis cuantitativo se basó en el estándar de silibina B y se utilizó el método estándar externo. Se generó una curva de calibración a partir de cinco concentraciones del compuesto en el rango de concentración de 0,1 a 1,0 mg / ml. Se realizaron tres mediciones del área de los picos para cada concentración de solución estándar. Los parámetros característicos de la curva de calibración obtenida fueron los siguientes: pendiente, 0.516 e intersección, 0.003. Se encontró que la curva de calibración era lineal en el rango de concentración probado. Se encontró que el coeficiente de correlación fue> 0.995. Debido a la dificultad de comprar estándares de silicristina, silidianina, silibina A, isosilibina A y B, las cantidades de estos compuestos se calcularon relacionando sus respuestas cromatográficas con la curva de calibración para silibina B.
análisis estadístico
Todos los datos se expresan como media ± desviación estándar (DE). El análisis de varianza (ANOVA) y la prueba F se utilizaron para evaluar la influencia de las condiciones de PLE en el rendimiento de silimarina. Los valores medios se consideraron significativamente diferentes cuando el resultado de los parámetros comparados difirió en un nivel de significancia de P=0.05. Para comprobar la significancia de cada coeficiente de Fisher, se utilizaron los valores P.
Resultados
La Figura 1a presenta el cromatograma típico del extracto PLE obtenido de los frutos de S. marianum L. Gaertner, mientras que la Figura 1b muestra el cromatograma de extracción de silimarina de la solución de cardo mariano preparada disolviendo el extracto seco estandarizado de S. marianum L. Gaertner en metanol (1 mg / mL). El análisis de cromatogramas de extractos de PLE o Soxhlet con el de la solución estandarizada (tiempos de retención, espectros UV-Vis e índice de pureza de pico) demostró que las condiciones cromatográficas aplicadas permiten una resolución suficiente de los compuestos examinados, picos numerados del 1 al 6, a partir de componentes de la matriz de muestra. Los picos se identificaron como: (1) silicristina, (2) silidianina, (3) silibina A, (4) silibina B, (5) isosilibina A y (6) isosilibina B, respectivamente.
¿Cómo extraer el cardo mariano?
A diferencia de la mayoría de las hierbas, las semillas de cardo mariano no se extraen muy bien en agua, ¡así que no intentes hacer una taza de té con ellas! En su lugar, coma las semillas recién molidas u obtenga una cápsula de buena calidad. Si usa las semillas, cómprelas enteras y luego muélelas según sea necesario (yo uso un molinillo de café para convertirlas en un polvo grueso). Las semillas tienen un sabor aceitoso, dulce y amargo a la vez; tal vez sean un sabor adquirido, pero no son desagradables en absoluto. Comience tomando de 1/2 a 1 cucharada por día espolvoreada sobre su comida y vea cómo se siente, ajustando la cantidad según lo necesite.
Ingredientes
1 taza de agua tibia
1 taza de alcohol 100 grados yo uso vodka
¾ a 1 taza de semillas de cardo mariano molidas si es posible
Instrucciones
Esterilice el tarro Mason que está utilizando colocándolo en agua hirviendo durante aproximadamente 10 minutos, o colocándolo en la rejilla en el horno a unos 250 grados durante 15 minutos.
Vierta todos los ingredientes en un frasco de vidrio.
Coloque una nueva tapa en el frasco y atorníllelo firmemente en su lugar con un anillo.
Agite el frasco vigorosamente durante aproximadamente 1 minuto.
Coloque el frasco en un lugar fresco y oscuro durante cinco semanas.
Agite el frasco todos los días para asegurarse de que las semillas de cardo mariano no floten hacia la parte superior y se infundan completamente con el alcohol y el agua.
Al final del número designado de semanas, cuele el cardo mariano lejos del líquido a través de un colador de malla fina, manteniendo el líquido. Si no tiene un colador de malla fina, use un colador pequeño y / o forre un colador con varios filtros de café para disminuir el tamaño de las aberturas.
¿Cuánto tiempo para que surta efecto el cardo mariano?
La semilla de cardo mariano podría proteger las células del hígado de sustancias químicas y medicamentos tóxicos. También parece tener efectos antiinflamatorios, antioxidantes y reductores de azúcar en sangre.
La mejora en los parámetros de estrés oxidativo se observó de forma constante a los seis meses' duración del tratamiento con un sistema de suministro de cardo mariano especializado (2). La mejora de los patrones de estrés oxidativo es responsable de mejorar la señalización de la insulina y el funcionamiento de las células hepáticas.
¿Cuánto tiempo se debe tomar el cardo mariano? (DOSIS de cardo mariano)
El cardo mariano se considera seguro en dosis de 420 mg / día por vía oral en dosis divididas hasta por 41 meses. Una fuente sugiere dosis diarias de 12 a 15 g de frutos secos para la dispepsia y los trastornos del sistema biliar, mientras que un extracto que contiene 200 a 400 mg / día de silimarina se considera eficaz en varios trastornos hepáticos.
Beneficios del cardo mariano
1. Apoya la salud del hígado
Uno de los usos más comunes del cardo mariano es para tratar problemas hepáticos. Un estudio de 2016 encontró que el cardo mariano mejoró el daño hepático inducido por la dieta en ratones. Se necesitan más pruebas para demostrar que el cardo mariano beneficia al hígado humano de la misma manera, pero los investigadores teorizan que sí. El ingrediente activo del cardo mariano, la silimarina, actúa como antioxidante al reducir la producción de radicales libres. Los científicos creen que esto crea un efecto desintoxicante, por lo que el cardo mariano puede ser beneficioso para los problemas hepáticos.
Sin embargo, hasta que no se lleven a cabo más investigaciones, el cardo mariano no se recomienda como la opción de tratamiento principal para los problemas hepáticos. Pero puede ser un tratamiento complementario útil para probar.
2. Promueve la salud de la piel
El aceite de cardo mariano se puede usar tópicamente para mejorar la salud de la piel.
El cardo mariano puede ayudar a promover una piel sana. Un estudio de 2015 encontró que el cardo mariano ayudó a mejorar las afecciones inflamatorias de la piel cuando se aplicó a la piel de ratones.
También se descubrió que el cardo mariano tiene efectos antioxidantes y antienvejecimiento en las células de la piel humana en un entorno de laboratorio en otro estudio.
Se necesita más investigación en humanos para identificar qué beneficios puede esperar una persona al aplicar cardo mariano en la piel.
3. Reduce el colesterol
El colesterol alto puede provocar problemas con la salud del corazón y aumentar las probabilidades de que una persona sufra un accidente cerebrovascular.
Un estudio de 2006 sugiere que el cardo mariano puede desempeñar un papel importante en mantener bajos los niveles de colesterol. Encontró que los niveles de colesterol eran más bajos en las personas que tomaban cardo mariano para tratar la diabetes que en las que tomaban un placebo.
4. Apoya la pérdida de peso
La investigación inicial con animales realizada en 2016 encontró que la silimarina causó pérdida de peso en ratones que fueron alimentados con una dieta destinada a causar aumento de peso.
Esto sugiere que el cardo mariano puede ser beneficioso para quienes buscan perder peso. Sin embargo, se necesita más investigación sobre los efectos del cardo mariano en la pérdida de peso en humanos para confirmar esto.
5. Reduce la resistencia a la insulina
Un estudio en ratones encontró que el extracto de cardo mariano ayudó a reducir la resistencia a la insulina. La resistencia a la insulina es un problema para las personas con diabetes tipo 2.
Aunque esta investigación sugiere que el cardo mariano podría desempeñar un papel en el control de la diabetes, se necesita más investigación para confirmar si el cardo mariano reduce la resistencia a la insulina y apoya el control de la diabetes.
6. Mejora los síntomas del asma alérgica
El ingrediente activo del cardo mariano puede ayudar a reducir la inflamación. Un estudio de 2012 encontró que la silimarina ayudó a proteger contra la inflamación en las vías respiratorias de ratones con asma alérgica.
Se necesita más investigación para ver si la silimarina beneficia los síntomas del asma en humanos.
7. Limita la propagación del cáncer.
El cardo mariano puede ayudar a detener la propagación de ciertos tipos de cáncer. Una revisión de 2016 encontró que el extracto de cardo mariano inhibe el crecimiento de células cancerosas en el cáncer colorrectal.
Se necesita más investigación para determinar cómo se puede usar el cardo mariano para ayudar a combatir el cáncer.
8. Apoya la salud ósea
El té de cardo mariano puede ayudar a prevenir la pérdida ósea causada por la falta de estrógeno. El cardo mariano puede desempeñar un papel esencial en el apoyo a la salud ósea. Un estudio de 2013 encontró que el cardo mariano ayudó a prevenir la pérdida ósea y analizó específicamente la pérdida ósea causada por una deficiencia de estrógeno. Todavía no está claro si el cardo mariano es igualmente beneficioso para la pérdida ósea con una causa diferente. Se necesitan más estudios antes de que sea seguro concluir que el cardo mariano es compatible con la salud ósea de los seres humanos.
9. Mejora la cognición
Un estudio de 2015 encontró que el cardo mariano aumenta la resistencia al estrés oxidativo. El estrés oxidativo es una causa potencial de la enfermedad de Alzheimer.
De esta manera, el cardo mariano puede ayudar a mejorar la cognición y tratar las condiciones degenerativas que afectan la mente. Se necesita más investigación en humanos para confirmar los efectos del cardo mariano en la cognición.
10. Estimula el sistema inmunológico
El cardo mariano puede ayudar a fortalecer la respuesta inmunológica&de una persona y ayudarla a combatir las infecciones.
Un estudio de 2016 sobre un modelo animal encontró que el extracto de cardo mariano mejora la inmunidad cuando se consume. Un estudio anterior encontró que el extracto de cardo mariano tuvo un efecto positivo sobre la respuesta inmunitaria en los seres humanos.
Se necesitan más estudios con participantes humanos antes de que los científicos puedan decir con certeza que el cardo mariano estimula el sistema inmunológico de una persona.
Efectos secundarios del cardo mariano
El cardo mariano parece tener pocos efectos secundarios, incluso cuando se toma durante varios años. Algunas personas tienen náuseas, diarrea, picazón e hinchazón.
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Referencias: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
